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| 豬瘟仍然是目前危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的最為重要的疾病 一、豬瘟免疫失敗的原因 1．母豬持續(xù)感染與垂直傳播 母豬持續(xù)感染和仔豬胎盤(pán)感染是目前引起免疫失敗的重要原因。我們首次在實(shí)驗(yàn)室成功地利用豬瘟野毒人工復(fù)制了豬瘟病毒持續(xù)感染的帶毒母豬動(dòng)物模型，此母豬可帶毒750天。這種豬甚至可以終生帶毒、排毒，可成為豬瘟病毒的主要儲(chǔ)存宿主，血液中的含毒量可達(dá)105—106PFU/ml。最早報(bào)道豬瘟胎盤(pán)感染是在1955年，以后此類(lèi)報(bào)道逐漸增多。胎盤(pán)感染后，引起母豬繁殖障礙，出現(xiàn)弱胎、死胎、甚至木乃伊胎，從死亡仔豬體內(nèi)可分離到豬瘟病毒。為了研究持續(xù)感染母豬對(duì)仔豬的胎盤(pán)垂直傳播情況，再將這頭母豬與人工感染另一株豬瘟野毒的帶毒公豬或健康公豬自然交配或人工受精使其懷孕產(chǎn)仔，可產(chǎn)下帶毒的木乃伊胎和死胎，用豬瘟熒光抗體檢查胎豬均為陽(yáng)性，此后該母豬不能再次配種。為了解帶毒母豬對(duì)同居豬和環(huán)境的污染情況，在母豬帶毒273天時(shí)，用健康陰性豬與之同居，可造成同居豬感染。至此成功地人工復(fù)制了豬瘟病毒胎盤(pán)垂直傳播及水平傳播的動(dòng)物模型，在實(shí)際工作中，這些持續(xù)感染帶毒豬的存在，可形成豬瘟常發(fā)地區(qū)和豬瘟常發(fā)豬場(chǎng)。由這種母豬產(chǎn)下的仔豬多為先天免疫耐受豬，這種情況常常導(dǎo)致豬瘟在豬場(chǎng)形成惡性循環(huán)，即豬瘟亞臨床感染→胎盤(pán)感染→母豬繁殖障礙→仔豬帶毒→后備母豬→亞臨床感染。如此惡性循環(huán)，使得帶毒豬在臨床中有3-33%的帶毒率。 2．仔豬先天免疫耐受 由母豬持續(xù)感染和仔豬胎盤(pán)感染引起的免疫失敗現(xiàn)象，除了出現(xiàn)上述生產(chǎn)水平降低的情況外，經(jīng)胎盤(pán)感染出生后存活的仔豬往往成為持續(xù)感染者，可長(zhǎng)期帶毒、排毒，其本身并不表現(xiàn)臨床癥狀。這種豬除了對(duì)豬場(chǎng)造成惡性循環(huán)外，這種經(jīng)胎盤(pán)感染的仔豬出生后，吸允初乳，數(shù)日內(nèi)病毒血癥可一過(guò)性降低，但病毒存在于全身上皮組織、淋巴樣組織和網(wǎng)狀內(nèi)皮組織，這種感染豬不能建立中和性抗體應(yīng)答，形成免疫耐受，以至于對(duì)疫苗免疫后不能產(chǎn)生免疫應(yīng)答。Liess用低毒力的野毒Glentorf株給妊娠40、70、90日齡的母豬滴鼻感染，結(jié)果引起母豬繁殖障礙，仔豬出生后多為死胎、木乃伊胎、流產(chǎn)，或出生后在1周內(nèi)到11周內(nèi)死亡，出生后存活的發(fā)病豬無(wú)臨床癥狀，解剖為胸腺萎縮、淋巴結(jié)腫大。由此證明了持續(xù)感染帶毒母豬所產(chǎn)仔豬對(duì)疫苗免疫后不能產(chǎn)生保護(hù)作用的免疫耐受機(jī)制。 另外，我們模擬生產(chǎn)中的實(shí)際情況，對(duì)無(wú)臨床癥狀的豬瘟陽(yáng)性經(jīng)產(chǎn)母豬所產(chǎn)仔豬進(jìn)行免疫效力試驗(yàn)研究。兩頭母豬分別產(chǎn)下兩窩仔豬，帶毒率分別為5/11和12/14，產(chǎn)仔時(shí)按仔豬產(chǎn)出順序隔頭進(jìn)行臨時(shí)豬瘟兔化弱毒疫苗接種，1小時(shí)后再吸初乳，再用標(biāo)準(zhǔn)石門(mén)強(qiáng)毒進(jìn)行攻擊。免疫豬瘟疫苗不能使帶毒仔豬產(chǎn)生免疫保護(hù)力，接種疫苗的5頭豬在強(qiáng)毒攻擊后死亡4頭。結(jié)果：豬瘟病毒持續(xù)感染對(duì)胎兒發(fā)育有不同程度的影響；豬瘟病毒持續(xù)感染母豬可經(jīng)過(guò)胎盤(pán)垂直傳播病毒給仔豬，攻擊前死亡的豬全是帶毒豬；吃初乳和疫苗接種不能阻止帶毒仔豬的死亡，并且形成免疫偏離現(xiàn)象或免疫耐受現(xiàn)象，導(dǎo)致免疫失敗，甚至誘發(fā)豬瘟，通過(guò)此項(xiàng)試驗(yàn)也得到了證實(shí)。通過(guò)病理切片觀察，豬瘟病毒持續(xù)感染可導(dǎo)致母豬生殖器官產(chǎn)生病理變化，特別是卵巢的病理變化，使卵泡結(jié)節(jié)化，降低或失去排卵功能，最后導(dǎo)致功能障礙及繁殖障礙。 3．帶毒公豬的垂直傳播 用RT-PCR檢查帶毒公豬自然交配所產(chǎn)死胎的病毒基因型，結(jié)果表明：死胎感染的病毒基因型與帶毒母豬原有的病毒基因型不同，而與帶毒公豬的病毒基因型相同。試驗(yàn)證明帶毒種豬不僅能通過(guò)母豬胎盤(pán)垂直傳播，而且能通過(guò)公豬精液垂直傳播豬瘟，這是造成豬瘟持續(xù)感染的又一重要原因。 綜上所述，豬瘟持續(xù)感染母豬造成的垂直傳播是引起仔豬死胎、木乃伊胎、弱胎及不發(fā)病的仔豬帶毒的主要原因之一，加之它所產(chǎn)生的水平傳播方式，還會(huì)造成其它豬的感染并污染環(huán)境。因此一旦種豬場(chǎng)有豬瘟病毒持續(xù)感染的種豬存在，就會(huì)引起免疫耐受，導(dǎo)致免疫失敗，時(shí)刻都有豬瘟發(fā)生的危險(xiǎn)。因此要根除豬瘟就必須從源頭抓起，及時(shí)淘汰帶毒種豬，對(duì)種豬場(chǎng)進(jìn)行徹底凈化。 4．非豬瘟病毒感染對(duì)豬瘟疫苗免疫效果的影響 造成豬瘟持續(xù)感染的原因目前還不十分清楚，經(jīng)初步研究還證實(shí)：豬瘟病毒反復(fù)多次感染及PPV、PRV和PRRSV混合感染均可造成豬瘟病毒在體內(nèi)的滯留而造成持續(xù)感染。利用20頭9月齡左右豬瘟、偽狂犬、豬繁殖與呼吸障礙綜合癥抗原、抗體陰性豬，將其分成6組，分別利用豬細(xì)小病毒（PPV）、豬偽狂犬病毒（PRV）和豬繁殖與呼吸障礙綜合癥病毒（PRRSV）單獨(dú)或混合感染，7天后，連同對(duì)照豬4頭，免疫接種豬瘟兔化弱毒疫苗（HCLV），13天后連同4頭陰性對(duì)照豬一起攻擊豬瘟石門(mén)強(qiáng)毒。整個(gè)試驗(yàn)期間分別每天測(cè)溫，觀察臨床癥狀，每周采集扁桃體和血樣做各種病毒抗原及抗體檢測(cè)。結(jié)果在攻擊石門(mén)強(qiáng)毒后2周，單獨(dú)和混合感染了非豬瘟病毒后接種HCLV疫苗的4個(gè)免疫組12頭豬除1頭外，11頭全為HCV抗原檢測(cè)陽(yáng)性，且多呈強(qiáng)陽(yáng)性；而單一HCLV疫苗免疫組在豬瘟強(qiáng)毒攻擊后檢測(cè)不到HCV；所有HCLV疫苗免疫豬均存活，而非免疫對(duì)照組4頭豬全部在攻毒16日內(nèi)死亡。試驗(yàn)表明非豬瘟病毒感染的確對(duì)豬瘟疫苗免疫效果有影響，能造成豬瘟疫苗免疫的失敗。 5．母源抗體及疫苗免疫程序?qū)σ呙缑庖叩挠绊?br /> 經(jīng)試驗(yàn)表明，當(dāng)母源抗體水平在1∶16時(shí)，使用2個(gè)免疫劑量疫苗接種3頭豬，在強(qiáng)毒攻擊后，雖然這些豬均存活下來(lái)了，但3頭豬均有持續(xù)24-72小時(shí)的潛伏期，體溫升高1.5-2℃，持續(xù)2.5-8天，而使用4個(gè)劑量免疫接種的3頭豬，僅1頭體溫升高2℃，持續(xù)時(shí)間僅為2.5天。其他兩頭豬既無(wú)潛伏期，又無(wú)體溫升高。試驗(yàn)表明，提高疫苗中的病毒含量對(duì)母源抗體不整齊的豬場(chǎng)的豬瘟控制是非常必要的。目前歐洲為了消滅豬瘟的亞臨床感染，多采用加大免疫劑量的方法。歐洲藥典規(guī)定用C株疫苗免疫時(shí)，肌肉注射劑量為100PD50（400RID）。我國(guó)豬瘟細(xì)胞苗出廠檢驗(yàn)以5萬(wàn)倍稀釋能致兔體熱反應(yīng)為合格，即每ML 原液含5萬(wàn)個(gè)RID，規(guī)定的免疫劑量為150 RID（含37PD50），遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，況且我國(guó)豬場(chǎng)中存在的豬瘟持續(xù)感染問(wèn)題和其他病原混合感染的問(wèn)題比發(fā)達(dá)國(guó)家嚴(yán)重的多，使用常規(guī)免疫劑量預(yù)防接種，在母源抗體參差不齊和有豬瘟病毒持續(xù)感染的豬場(chǎng)，要想有效地控制豬瘟是不可能的，很有必要借鑒發(fā)達(dá)國(guó)家控制豬瘟的做法，提高疫苗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)政府采購(gòu)制定的標(biāo)準(zhǔn)符合這一要求。 6．疫苗質(zhì)量對(duì)免疫效果的影響 豬瘟疫苗的質(zhì)量好壞，直接影響豬瘟的免疫效果。我國(guó)的豬瘟疫苗存在兩大問(wèn)題，一是疫苗中病毒含量低。在脾淋組織疫苗方面，我國(guó)現(xiàn)有豬瘟兔脾淋組織疫苗工藝落后，制造疫苗所需的大耳白兔子數(shù)量太少，而且由于品種退化的原因，遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了需要，同時(shí)效力檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)太低；在牛睪丸原代細(xì)胞疫苗方面存在的問(wèn)題更大，我們現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)只有歐洲等發(fā)達(dá)國(guó)家的1/4，病毒含量太低，在其他疾病混合感染，母源抗體存在的情況下，很難達(dá)到應(yīng)有的免疫效果。除此之外，由于牛感染BVDV非常普遍，有牛睪丸原代細(xì)胞生成疫苗，不可避免的會(huì)遭到BVDV污染，污染了這種病毒，一是直接影響病毒在細(xì)胞中的增殖，同時(shí)還會(huì)造成BVDV疾病的傳播，直接影響胎兒存活。運(yùn)輸?shù)睦滏溝到y(tǒng)不完善導(dǎo)致豬瘟病毒存活力降低也是引起豬瘟免疫失敗的重要原因。 我國(guó)的中國(guó)系（C系）豬瘟兔化弱毒疫苗是目前世界上最好的豬瘟疫苗，世界上許多國(guó)家通過(guò)免疫接種這種疫苗，控制以至消滅了豬瘟。我們的實(shí)驗(yàn)室工作也證明，豬瘟兔化弱毒疫苗免疫接種豬可有效地抵抗多種野毒株的攻擊。因此可以認(rèn)為，豬瘟兔化弱毒疫苗仍然是目前我國(guó)使用控制豬瘟最為有效的疫苗。盡管豬瘟兔化弱毒疫苗有如此之多的優(yōu)點(diǎn)，但在實(shí)際應(yīng)用中，疫苗的質(zhì)量問(wèn)題仍是大家非常關(guān)心問(wèn)題。我國(guó)豬瘟的免疫失敗跟豬瘟疫苗的質(zhì)量有著直接的關(guān)系。我國(guó)豬瘟疫苗存在的問(wèn)題主要有以下幾個(gè)方面： （1） 細(xì)胞疫苗： 1） 利用牛睪丸原代細(xì)胞制造的疫苗疫苗生產(chǎn)工藝不穩(wěn)定，批間差異大，病毒滴度太低，免疫效果差； 2） 利用牛睪丸細(xì)胞生產(chǎn)疫苗容易導(dǎo)致BVDV或BDV的污染。BVDV和BDV與HCV同屬瘟病毒，均可導(dǎo)致胚胎發(fā)育不良或死亡和形成免疫耐受。用污染BVDV或BDV的細(xì)胞生產(chǎn)疫苗，由于競(jìng)爭(zhēng)抑制的原因，豬瘟病毒在細(xì)胞中的增殖會(huì)明顯受到影響，這也是導(dǎo)致豬瘟牛睪丸原代細(xì)胞疫苗毒價(jià)低的主要原因之一。 （2）脾淋組織疫苗： 1）制造疫苗所需的大耳白兔子數(shù)量太少，而且由于品種退化的原因，遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了需要。 2) 生產(chǎn)工藝落后，利用動(dòng)物組織制苗，易造成外源病原污染，由于當(dāng)前我國(guó)缺乏制苗兔子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，特別是對(duì)兔子體內(nèi)的病原缺乏檢測(cè)方法和標(biāo)準(zhǔn)，很難保證疫苗的純凈性。如兔出血熱病毒。試驗(yàn)證明：用兔出血熱病毒疫苗免疫兔，影響HCV的增值。 新近研究成功的用傳代細(xì)胞系生產(chǎn)的豬瘟疫苗則很好的解決了這一問(wèn)題。該疫苗的病毒含量比原代細(xì)胞生產(chǎn)的疫苗提高了近20倍，達(dá)到甚至超過(guò)了政府采購(gòu)的疫苗標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)有效解決了疫苗中BVDV或BDV外源病原污染的問(wèn)題。 |
